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彗星實驗
發布時間： 2026-06-25 點擊次數： 72次彗星實驗（Comet assay）又稱單細胞凝膠電泳實驗，是在單細胞水平檢測有核細胞DNA斷裂的技術。細胞受到氧化應激、輻射、化學物質等損傷因子作用時，DNA鏈會發生斷裂，形成大小不一的片段。在堿性條件下，DNA雙鏈解旋，斷裂的DNA片段從核中釋放出來，在電場作用下向陽極遷移，形成彗星形態。DNA受損越嚴重，遷移的DNA量越多，遷移距離越長。通過測定遷移部分的長度可定量測定單個細胞DNA損傷程度。
實驗過程：
1. 準備細胞；
2. 第一層凝膠德制備：在載玻片上，1%正常熔點瓊脂糖凝膠的制備，加蓋玻片，4℃放置大于10min使其凝固；
3. 第二層凝膠的制備：10ul細胞（104個）和75ul的0.7%低熔點瓊脂糖混合均勻，滴加到第一層凝膠上，4℃放置大于10min；
4. 在4℃細胞裂解過夜；
5. 將載玻片放入水平電泳槽中，倒入4℃預冷的電泳緩沖液，室溫放置60min；
6. 電泳電壓設定為20V，時間20min；
7. 電泳后將載玻片置于平皿內，加入中性緩沖液，4℃中和1-3次，每次10min；
8. 在載玻片上滴加20ulPI溶液，避光染色10min ，超純水洗滌3次，蓋上蓋玻片；
9. 實驗結果。
